آنزیم پراکسیداز خردل
آنزیم پراکسیداز خردل (HRP) که در ریشهی گیاه خردل یافت میشود، در کاربردهای زیستشیمیایی بسیار مورد استفاده قرار میگیرد. این آنزیم یک متالوآنزیم است که با اکسید کردن سوبستراهای آلی توسط پراکسید هیدروژن، واکنشهای مهمی را کاتالیز میکند.
ساختار
ساختار این آنزیم برای اولین بار در سال ۱۹۹۷ با استفاده از کریستالوگرافی پرتو ایکس تعیین شد. HRP یک گلیکوپروتئین بزرگ با ساختار مارپیچی آلفا است که هم به عنوان کوفاکتور دارد.
سوبستراها
به تنهایی، آنزیم HRP ارزش کمی دارد، اما با استفاده از سوبستراهایی که در معرض اکسیداسیون قرار میگیرند، تغییر رنگ قابل تشخیصی ایجاد میکند. سوبستراهایی مانند TMB، DAB و ABTS باعث تولید رنگ میشوند، در حالی که سوبستراهایی مانند لومینول نور تولید میکنند.
کاربردها
HRP در تکنیکهایی مانند وسترن بلات، الایزا و ایمونوهیستوشیمی کاربرد دارد. این آنزیم به دلیل اندازه کوچک، پایداری بالا و هزینه کم، گزینهای ایدهآل برای تشخیص مولکولی است. همچنین در تصفیه پسابهای صنعتی برای حذف ترکیبات آروماتیک هیدروکسیله استفاده میشود.
شیمیلومینسانس تقویتشده (ECL)
HRP در تکنیک ECL با اکسید کردن لومینول، نوری با طول موج ۴۲۸ نانومتر تولید میکند. با استفاده از تقویتکنندهها، شدت نور تا ۱۰۰۰ برابر افزایش مییابد، که حساسیت تشخیص را بالا میبرد.
تقلید از HRP
مواد مصنوعی مانند نانوذرات اکسید آهن و کمپلکسهای حاوی همین، برای تقلید از عملکرد HRP استفاده شدهاند. این آنزیمهای مصنوعی در تشخیص بیومارکرها و رنگآمیزی ایمونوهیستوشیمیایی کاربرد دارند.